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如何预防细胞培养的过程中感染支原体细胞培养的措施

核心提示:

细胞培养是指在体外模拟体内环境(无菌、适宜温度、酸碱度和一定营养条件等),使之生存、生长、繁殖并维持主要结构和功能的一种方法。细胞培养也叫细胞克隆技术,在生物学中的正规名词为细胞培养技术。目前被广泛用于教学、实验室和临床实验。


细胞培养技术的研究应用:

1. 直接观察活细胞的形态结构和生命活动。用于细胞学、遗传学、免疫学、实验医学、肿瘤学和CAR-T细胞治疗等多种学科研究.

2. 研究细胞种类如低等到高等到人类、胚胎到成体、正常组织到肿瘤。

3. 直接观察细胞的变化可便于摄影, 易于施用物理、化学生物的实验研究。

4. 便于使用各种技术:相差、荧光、电镜、组化、同位素标记等方法观察和研究细胞状况。

5. 易于提供大量生物性状相似的实验对象,是分子生物学和基因工程学的研究对象,也是其主要的组成部分。

6. 成为生物制品单克隆抗体生产和基因工程等的材料来源。

 

细胞培养过程中的支原体的污染源:

细胞培养过程中的污染控制是细胞培养成功的关键。引起培养细胞污染的微生物有细菌污染、霉菌污染、支原体污染、黑胶虫污染、真菌污染、原虫污染等其中支原体是常见的污染物。支原体属于缺乏细胞壁的原核微生物,大小介于细菌和病毒之间,可透过一般滤膜,因此在细胞培养过程中,细胞极易受到支原体感染染。正在使用的细胞体系中支原体污染发生率相对来说是比较高的,支原体感染发生后培养液清澈不浑浊,但PH值变化明显,培养液更换后几小时内变为酸性(颜色变黄)。污染初期,显微镜高倍镜下观察发现细胞外形无明显变化但有细小黑色颗粒,所以不容易被发现。虽然支原体可以与细胞长期共存,且随着细胞换液而缓解,但细胞遭受支原体污染后会抑制细胞生长,改变细胞的DNA/RNA及蛋白表达,使细胞的转染效率大大降低,并在污染后期引起细胞变形,对后续教学、科研产生严重影响。细胞培养过程中的的污染源可能有环境、物体表面、实验试剂耗材、空气等,在细胞培养的任何一个环节,都需要保持无菌操作意识,防止细胞污染。

 

预防细胞培养的过程中感染支原体的方法:

1.保持操作环境清洁:无菌室的滤膜要定期清洗和更换;每次进行细胞培养操作前,无菌室和超净台都要用诺福消毒灭菌专用剂进行消毒灭菌;每次实验完毕要用诺福消毒灭菌专用剂浸泡的抹布擦拭操作台,避免交叉污染;定期对二氧化碳培养箱进行消毒灭菌。

2.实验用品无菌处理:所有用品都要经过消毒灭菌;培养基、血清、胰酶等试剂均要经过检测确定无支原体污染后方可使用。

3.操作者遵守无菌室消毒规定:由于人口腔带有支原体,因此进入无菌室一定要带好口罩、帽子(口罩必须罩住口鼻,帽子必须将头发全遮在里面),鞋套,穿隔离衣,带乳胶手套,并用诺福消毒灭菌专用剂擦拭手套表面。

4.操作过程严格按照无菌操作要求:开始要先用诺福消毒灭菌专用剂用棉球擦拭瓶口,在火焰上烧灼瓶口,必须在火焰周围无菌区内打开瓶口,瓶口要再次转动烧灼;要常更换吸管,一旦发现吸管触及手和其他物品应弃去。所有操作过程要在距离超净台边缘一定距离,保证在无菌区域进行。

5.定期进行支原体污染检测:对实验室中的培养物定期进行支原体检测,预防为主,不能等到发现有支原体污染时再进行检测,发现已经污染支原体的培养物,灭活后弃之,严禁随意倾倒、随意丢弃。及时更换新的培养物,避免支原体污染。

6.环境空气消毒:用诺福杀孢子专用剂通过欧菲姆的干雾灭菌设备喷洒出颗粒仅有5-10微米干雾灭菌剂,在一定的空间区域内悬浮在空气中,干雾颗粒进行无规则运动扩散到所有的空间中(布朗运动原理),可以有效的灭菌空气中的细菌、真菌、病毒等有害微生物。

 

国内外的制药厂、生物实验室、研究所、科研机构一直使用诺福高效灭菌剂和欧菲姆干雾灭菌设备,能迅速有效的杀灭支原体,减少日常维护和清洁的时间。

诺福杀孢子专用剂和欧菲姆干雾灭菌设备整体方案,具备实验室空间消毒灭菌的众多优势:

1.高效消毒灭菌,能够迅速杀灭病原菌(支原体、衣原体、立克次氏体)、芽孢在内的200多种微生物,对嗜热脂肪杆菌芽孢10分钟有6个对数值的杀灭率;

2.设备体积小,操作方便,灵活移动满足不同空间需求,便于携带和移动;

3.平均5um干雾颗粒,扩散性非常优良,能扩散到每一个角落,在空气中做不规则布朗运动;

3.欧盟原装进口,品质保证,验证资料齐全,提供验证模板,容易通过GMP灭菌验证;

4.无色无毒,无残留,安全可靠,完全分解为氧气和水;

5.验证资料齐全,提供验证模板,容易通过高标准灭菌验证;

6.杀菌时间超短,2-3个小时可完成整个灭菌流程,高效节能;

7.干雾气体性能稳定,不受环境湿度、温度、活性稳定攻击微生物活体;

8.性价比高,节约消毒成本。

注:什么叫清洁,抑菌,防腐,消毒,灭菌:

清洁:是指用物理的方法除去物体表面的污垢、尘埃和有机物,其目的是去除和减少微生物。

抑菌:抑制体内或体外细菌的生长繁殖。

防腐:防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法。

消毒:是指用物理或化学的方法消除或杀灭芽孢以外的所有病原微生物。

灭菌:是指用物理或化学的方法杀灭全部微生物,包括致病和非致病微生物,也包括细菌芽孢和真菌孢子。

编辑:xyangm




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